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动物蛋白质饲料消化率的测定(胃蛋白酶法)

发布日期:2018-02-02

浏览次数:545

一 范围

本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。本标准适用于所有动物性蛋白质饲料,不适用于植物性蛋白质或混合饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。 

二 引用标准 

GB/T 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法 

GB/T 6433-1994 饲料粗脂肪测定方法 

GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 

三 原理 

脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液,在恒温、持续不断地搅拌下消化16h,过滤分离不溶性残渣, 洗涤、干澡,测定残渣的粗蛋白含量。同时,测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量。 

四 试剂 

本标准所用的试剂,除特殊说明外,均为分析纯。实验室用水符合GB/T 6682 中三级水的规格。4.1 胃蛋白溶液,2g/L:将6.1mL 浓盐酸稀释至1000mL 水中(溶液pH~20),加热至42~45℃,加入2g 活性为1:10000 生化级胃蛋白酶〔若活性不是1:10000,可使用活性1:3000 生化级胃蛋白酶(不可使用非生化级胃蛋白酶),应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU〕,并缓慢搅拌直至溶解。勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前配制。4.2 乙醚。4.3 丙酮。4.4 定氮试剂,按GB/T6432 中试剂及配制方法规定。 

五 仪器设备 

5.1 恒温式平转摇床,温控范围20~50℃,水浴式或空气式均或,转速可调(15~300r/min)。

5.2 实验室用样品粉碎机。

5.3 索氏抽提器、脱脂设备:5.3.1 分析天平:感量0.0001g。5.3.2 电热恒温水浴锅:室温~100℃。5.3.3 恒温烘箱:50~200℃。5.3.4 索氏脂肪提取器(带球形冷凝管):100 或150mL。5.3.5 索氏脂肪提取仪。5.3.6 滤纸或滤纸筒:中速,脱脂。5.3.7 干燥器:用氯化钙(干燥级)或变色硅胶为干燥剂。 

5.4 定氮仪器设备:5.4.1 消煮炉或电炉 5.4.2 滴定管,酸式,10、25mL 5.4.3 凯氏烧瓶,250mL 5.4.4 凯氏蒸馏装置,常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式5.4.5 锥形瓶,150、250mL 5.4.6 容量瓶,100mL  5.4.7 消煮管,250mL5.4.8 定氮仪,以凯氏原理制造的各类型半自动,全自动蛋白质测定仪 

5.5 实验室常用仪器设备。 

六 试样制备 

取具有代表性试样,用四分法缩分至200g,然后粉碎至全部过0.90mm 孔重申(20 目),混匀装于密封容器,保存备用。 

七、操作步骤 

7.1 脱脂:称取1~2g 试样用乙醚脱脂(含脂肪小于1%可不脱脂,含脂肪1%~10%建议脱脂,含脂肪大于10% 则必须脱脂)。脱脂方法可参照GB/T6433 中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。   7.2 胃蛋白酶消化:称取脱脂烘干后的样品若千克(精确至0.0002g,含氮量约5~80mg)于250mL 带盖磨口瓶中,加150mL 新配制的并已预热至42~45℃的胃蛋白酶溶液,要确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿,盖紧瓶盖,将瓶夹于恒温摇床上,于45℃恒定搅动16h 进行保温消化。   7.3 消化残渣的处理 :从搅动器上取下磨口瓶, 呈45°角放置,让残渣沉淀15min 以上,随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上抽滤,先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上,再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上,慢慢倾出内容物,使之通过滤纸形成连续的细流,避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。当上层液体通过滤纸后,于瓶中加入15mL 丙酮,用拇指住瓶口剧烈振摇,放开。再用拇指堵住瓶口,在滤纸上方将瓶倒置振摇,放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15mL 的丙酮进行洗涤,照上法振摇和倒出。检查瓶子,并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸,无损地移入凯氏烧瓶中,并将凯氏烧瓶置于105 ℃烘箱内烘干。   7.4 粗蛋白的测定:将上述(7.3)烘干的残渣按GB/T 6432 中方法测定粗蛋白含量(W2)。同时,称取脱脂烘干(7.1)后的样品若干克(精确至0.0002g,含氮量约5~80mg),直接按GB/T 6432 方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白的含量(W1)。 

八、 结果计算 

结果按式(1)计算  X(%)= 100(W1-W2)/W1…………………………(1)   式中;X——试样的胃蛋白酶消化率,%;   W1——脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量,%; W2——脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量,%; 所得结果表示到小数点后一位。 

九、精密度 

每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定,以其算术平均值为测定结果。测定结果的相对偏差按GB/T 6432 中粗蛋白测定的相对偏差允许范围。